活性試劑盒是一種利用熒光探針DCFH－DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH－DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內(nèi)后，可以被細胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內(nèi)。細胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內(nèi)活性氧的水平。

 

　　活性試劑盒對于刺激時間較短（通常為2小時以內(nèi)）的細胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對于細胞刺激時間較長（通常為6小時以上）的細胞，先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞，后裝載探針。

 

　　細胞凋亡可通過兩種起始途徑啟動，內(nèi)始式途徑由非受體刺激激活，如DNA損傷、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、代謝應激，線粒體外膜通透性改變，如細胞色素c釋放，外源途徑通過死亡受體與配體結合開始。

 

　　對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測，也可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察。

 

　　注意事項：

 

　　1、盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間（刺激時間除外），以減少各種可能的誤差。

 

　　2、探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導致背景較高。

 

　　3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

　　4、探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的裝載情況是否良好。